Иммунная фенотипизация

Для определения биологической сущности клетки, входящей в состав крови, ее можно отдифференцировать от здоровых клеток по поверхностным признакам (клеточным белковым структурам) при помощи моноклональных антител.

На поверхности каждой клетки находятся специфические белковые структуры, так называемые антигены. Они могут связываться с моноклональными антителами, которые в свою очередь связываются с флуоресцирующими красителями. Начинается реакция антиген-антитело.

Когда исследуемые клетки попадают под лазерный луч, то флуорохромы начинают поглощать свет. Иммунная фенотипизация позволяет не только обнаружить клетки и флуоресцирующие антитела, но и оценить особенности рассеянного ими света. Тем самым можно определить принадлежность каждой клетки к специфической популяции.

Материал для исследования
В принципе, иммунную фенотипизацию можно выполнить для клеток, содержащихся во всех без исключения жидкостях организма. Но для иммунологических исследований чаще всего используют

  • периферическую кровь (не менее 2 мл)
  • костный мозг (не менее 2 мл)
  • цереброспинальный ликвор (> 100 клеток/мкл; не менее 2 мл)
  • плевральную или асцитную жидкость (не менее 50 мл)
  • смыв бронхо-альвеолярного лаважа (БАЛ) (не менее 25 мл).

Преаналитика

  • Взятие периферической крови и костного мозга лучше всего производить в содержащие гепарин шприцы (литий-гепарин без геля). Если в качестве антикоагулянта используется EDTA, то образец необходимо быстро доставить в лабораторию и приступить к исследованию (на протяжении 12–24 часов). Доставка и хранение материала для исследования (неразведенного, с антикоагулянтом) производится при комнатной температуре (18–22 °C).
  • Плевральную и асцитную жидкость, а также смыв БАЛ необходимо незамедлительно доставить в лабораторию в специальной емкости, в охлажденном виде.

Показания для исследования
Типизация патологических субпопуляций предполагает прежде всего характеристику иммунологического фенотипа лейкемических бластов или клеток лимфомы, выделенных из периферической крови, костного мозга, плевральной и асцитной жидкости при:

  • остром миелобластном лейкозе (ОМЛ),
  • остром лимфобластном лейкозе (ОМЛ),
  • бластном кризе хронического миелопролиферативного синдрома (МПС),
  • лейкемическом течении неходжкинских лимфом (НХЛ).

Иммунная фенотипизация смыва БАЛ позволяет выполнить дифференциальную диагностику и оценку активности интерстициальных заболеваний легких (напр., саркоидоза, идиопатического пульмонального фиброза, эозинофильной пневмонии, различных форм альвеолита легких).

Иммунный статус
Кроме того, метод иммунной фенотипизации периферической крови можно использовать и для определения обычного иммунного статуса. При этом речь идет о количественном анализе лейкоцитов и их подгрупп (B-лейкоциты, CD4- и CD8-T-лимфоциты, натуральные киллеры/NK-клетки, активированные T-лимфоциты). Данное исследование позволяет выявить и контролировать процесс терапии как врожденных, так и приобретенных иммунодефицитов, прежде всего ВИЧ-инфекции.

Пациентам, иммунный статус которых снижен в результате приема специальных препаратов, напр., после химиотерапии (специальный код 32012), при низком уровне CD4+-T-лимфоцитов (< 200/мкл) рекомендована профилактическая антибиотикотерапия (триметоприм 160 мг, три раза в неделю). Это предотвратит оппортунистические инфекции, прежде всего Pneumocystis carinii.

Оценка результатов
Информативность иммунной фенотипизации заключается в классификации популяции патологических клеток, позволяющей определить гематологическое заболевание. Результаты данного исследования определяют необходимость дальнейших исследований и назначение специфической терапии соответствующего заболевания. Иммунная фенотипизация является вспомогательным инструментом для дифференциальной диагностики гематологических заболеваний.


Литература
Sack, U., Tárnok A., Rothe, G.: Zelluläre Diagnostik. Grundlagen, Methoden und klinische Anwendungen der Durchflusszytometrie. Karger Verlag (2007)
Schmitz G., Rothe, G.: Durchflusszytometrie in der klinischen Zelldiagnostik.
Schattauer Verlag (1994)

Вверх

Назад